維生素 B12 含量檢測試劑盒說明書

高效液相色譜法
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
貨號: BC4794
規格:50T/48S

產品簡介：
維生素 B12（Vitamin B12）為 B 族維生素之一，是一類含鈷的復雜有機化合物。人體內每天需
要量最少的一種，過量的維生素 B12 會產生毒副作用。
維生素 B12 在 210 nm 處存在紫外吸收，可利用紫外檢測器測定其含量。
試驗中所需的儀器和試劑：
高效液相色譜儀（Polaris C18-A 色譜柱（4.6×250 mm），紫外檢測器（VWD））、臺式離心
機、可調式移液槍、研缽/勻漿器、EP 管（1.5 mL）、針頭式過濾器（水系）、注射器、抽濾器、
濾膜（水系、有機系）、棕色進樣瓶、超純水、甲醇（色譜純）。

產品內容：
提取液：液體 30 mL ×1 瓶，4℃保存。本提取液中含有不溶物，需搖勻后使用。
試劑一：液體 5 mL ×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 1.5 mL ×1 瓶, 4℃保存。
試劑三：粉劑×2 瓶，4℃保存。
標準品：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 1 mL 蒸餾水配制成 5 mg/mL 維生素 B12 標準
溶液，4℃密封保存，避免陽光直射。

實驗前準備工作：

1. 將 1 瓶試劑三溶解到 1000 mL 超純水中，再加入 0.55 mL 的試劑二，混勻，得到流動相 A。
   2. 將 1000 mL 配制好的流動相 A、甲醇（色譜純）用濾膜抽濾。（配制好的流動相 A 采用 0.22 µm
   水系濾膜抽濾，甲醇采用有機系濾膜抽濾）。
   3. 將抽濾好的流動相超聲 20 min，除去氣泡。
   4. 標準品的配制：將 5 mg/mL 的維生素 B12 標準溶液采用倍比稀釋的方法分別用蒸餾水稀釋成
   500μg/mL、100 μg/mL、20 μg/mL、4 μg/mL、0.8 μg/mL 的維生素 B12 標準溶液。（標準品濃度僅
   供參考，可根據實際樣品濃度進行調整）。4℃避光保存（密封），測試前采用水系針頭式過濾器
   過濾到棕色進樣瓶內，待測

注意事項
1. 本試劑盒提取液中含有不溶物，需搖勻后使用。
2. 測試完畢后，需要用高濃度的超純水相沖洗色譜柱（約 20-30 個柱體積），以防阻塞色譜柱，再
用高濃度的有機相沖洗色譜柱，最后按柱子的種類規范沖洗，防止損傷色譜柱。
3. 標準品的稀釋倍數要根據樣品中維生素 B12 的濃度確定，樣品中維生素 B12 的峰面積必須在不
同濃度的標準品溶液的峰面積之內，該標準品的稀釋倍數只是一個參考。若樣本中維生素 B12 濃度
過高，建議用蒸餾水稀釋后再測。
4. 若樣本量過大，建議每天測試一次標準溶液（一個濃度的標準溶液即可），以確定相應的保留時
間，待測溶液測試前須放置至室溫狀態。
5. 為了排除梯度洗脫基線漂移的影響，可進行一次空白檢測

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