試劑二：臨用前加入15 mL試劑一充分溶解備用，用不完的試劑2-8℃保存兩周。

標準品：10 mg無水*萄糖。臨用前加入1 mL試劑一溶解，制備10 mg/mL葡萄糖標準液備用，2-8℃保存兩周。

如果加入試劑三，煮沸10min后有混濁物出現，建議離心除去沉淀（10000rpm，2min），取上清測定吸光度；

如果吸光值大于1，可以用試劑一將上清液稀釋后測定（計算公式中乘以相應稀釋倍數）；若吸光值較小，可以增加上清液體積或者土樣質量進行測定。

取兩管0.1g林土，測定管加入試劑二800μL、甲苯20μL，對照管加入試劑一800μL、甲苯20μL，37℃準確水浴1h后，煮沸10min，離心取上清稀釋5倍，之后按照測定步驟操作，計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.191-0.074=0.117，標準曲線：y=5.1864x-0.1698，x=0.055，計算酶活得：S-NI（U/g 土樣）=19.2×x÷W×5（稀釋倍數）=19.2×0.055÷0.1×5（稀釋倍數）=52.8 U/g 土樣。

取兩管0.1g土樣，測定管加入試劑二800μL、甲苯20μL，對照管加入試劑一800μL、甲苯20μL，37℃準確水浴1h后，煮沸10min，離心取上清稀釋5倍，之后按照測定步驟操作，計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.161-0.086=0.075，標準曲線：y=5.1864x-0.1698，x=0.047，計算酶活得：S-NI（U/g 土樣）=19.2×x÷W×5（稀釋倍數）=19.2×0.047÷0.1×5（稀釋倍數）=45.12 U/g 土樣。