以下是對PCR定量試劑盒產品特性的詳細分析:
1. 靈敏度與特異性
高靈敏度:定量試劑盒能夠檢測極低拷貝數的目標核酸,通??蛇_到單拷貝或亞拷貝級別,適用于微量樣本或低表達基因的檢測。
高特異性:通過特異性引物和探針設計,確保僅擴增目標序列,減少非特異性擴增和背景干擾。
2. 準確性與重復性
定量準確:基于熒光信號(如TaqMan探針、SYBR Green)或熒光染料(如EvaGreen)的實時監測,實現精確的核酸定量。
重復性好:優化的反應體系和標準化的操作流程,確保不同批次實驗結果的一致性。
預混體系:許多試劑盒提供預混的Master Mix,包含DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液等,減少操作步驟和誤差。
快速設置:通常只需加入模板和引探針即可,適合高通量檢測。
4. 適用性廣泛
樣本類型多樣:可用于DNA、RNA(需反轉錄)或直接檢測病毒等病原體。
應用場景豐富:適用于基因表達分析、病原體檢測、基因分型、miRNA研究等。
5. 抗干擾能力
抑制物耐受性:部分試劑盒優化了反應體系,對樣本中的抑制物(如血液、組織裂解液)具有較強耐受性。
背景低:通過優化探針設計或熒光染料選擇,降低非特異性熒光信號。
6. 檢測范圍與動態范圍
寬動態范圍:通??筛采w10個數量級,適用于不同濃度樣本的檢測。
線性關系好:在標準曲線范圍內,Ct值與模板濃度呈良好的線性關系。
7. 熒光檢測模式
TaqMan探針法:特異性高,適合多重檢測,但成本較高。
SYBR Green/EvaGreen法:成本低,但需注意非特異性擴增的驗證。
熒光共振能量轉移(FRET)探針:適合復雜樣本或高靈敏度需求。
8. PCR定量試劑盒穩定性與保存條件
穩定性好:試劑盒通??稍?20℃長期保存,避免反復凍融。
抗污染設計:部分試劑盒含UDG酶或dUTP,防止氣溶膠污染。
9. 局限性
依賴設備:需要實時熒光定量PCR儀,不適合資源有限的實驗室。
成本問題:高*試劑盒(如TaqMan探針法)成本較高,可能限制大規模使用。
假陽性風險:操作不當或樣本污染可能導致假陽性結果。