將目標抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中的目標連接于固相載體上的抗體結合，然后加入微生物化的目標抗體，將未結合的生物素抗體洗凈后，加入HRP標記和親和素，再次洗滌后加入TMB底物顯色。
TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度，計算樣品濃度。
人抗胰蛋白酶elisa試劑盒儲存及有效期：
1、未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。
2、使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。
elisa試劑盒的穩定性：
經測定，人抗胰蛋白酶elisa試劑盒在有效期內按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響，實驗室的環境條件需盡量保持一致，尤其是實驗室內溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進行操作可減少人為誤差。
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